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elisa检测中显色常见问题的解决
点击次数:898 发布时间:2014-07-24

elisa检测中显色常见问题的解决
 


所有检测孔均无色
原因可能为酶结合物或底物失效、底物漏加(错加)、阳性对照漏加或错加,其中以酶结合物失效和底物错加为常见。查找原因的方法是将酶结合物与底物直接混合,观察有无显色;如显色则提示为阳性对照漏加或底物错加所致;若不显色,用新酶结合物与底物混合,观察有无显色;不显色则提示底物失效,显色提示原用酶结合物失效。在确定底物错加或失效者,若来加终止液。可重新洗板再显色。
 
所有检测孔均显色
原因多为洗板不净(扎内残留未结合的酶结合物)或显色时间过长。洗板是elisa检测重要环节.应严格按说明书进行,可以适当延长浸泡时间、增加洗涤次数l~2次,否则极易导致假阳性(竞争抑制法为假阴性)结果。
 
质控孔无色
一般为酶结合物活性降低所致(排除底物错加、失效及漏加质控物)。质控物一般为临界值的,是确定试验成功与否的重要依据。阳性对照虽然显色,但可以发现其吸光度变化较大,该批试验须重作,防止弱阳性结果的漏检。
 
底物有颜色
目前国产elisa试剂盒的色原底物常为A、B两种液体,分别为一定浓度的双氧水和四甲基联苯胺(TMB)或邻苯二胺(OPD)溶液,他们都不稳定,使用保存不当易产生颜色;在使用时发现有颜色(或各取一滴混合后显色),说明他们变质或已受污染,必须丢弃。
 
试剂盒的贮藏应按说明书的要求,在elisa检测中应严格按照elisa的操作规则执行,避免elisa大神棋牌检测中的常见实验问题。

 

 

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