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蛋白提取操作时应注意的细节!!!
点击次数:25 发布时间:2020-07-08

避免蛋白降解:

总体规则:蛋白酶普遍存在,在提取蛋白质的步骤中,早些抑制,经常抑制

分装蛋白溶液,储存于不同的温度和不同的缓冲液中,测蛋白活性,找出最适储存条件。

冷藏,并加入稳定剂。这些稳定剂一般都能充分保持蛋白的生物学活性。

将蛋白溶液储于50%(V/V)的甘油或悬于硫酸铵(3.2M)中,避免冻存

冰结晶会造成物理剪切及蛋白变性。

避免酶的反复冻融,如果酶需要冻存,分装成小管后冻存。

蛋白质的储存:

蛋白样品在液氮中速冻,拿出后加入10-20%的甘油,长期储存

整个实验过程中,都要将蛋白样品置于冰上

从母管中吸取不同的蛋白时,都要用新鲜的枪头

不要将未用的溶液倒回母管

戴手套操作,避免蛋白交叉污染,或是蛋白酶的污染

避免剧烈的震荡,避免溶液中混入蛋白变性剂

实验的过程中应避免灰尘进入,灰尘包含60%的肌氨酸

操作过程中:

操作时总是小体积小量的操作,避免污染,并且动作要快

a:此类蛋白酶在活性中心包含丝氨酸和组氨酸。

b:此类蛋白酶在活性中心包含半胱氨酸(巯基,-SH-)。

c:此类蛋白酶在活性中心包含金属离子(如:n2+,Ca2+,Mn2+)。

d:此类蛋白酶在活性中心包含天冬氨酸族。


生物试剂的使用常识:
(1)试剂切忌与手接触(有些试剂有强腐蚀性、等特性)。
(2)要用洁净的药勺,量筒或滴管取用试剂,绝对不允许用同一种工具同时连续取用多种试剂。取完一种试剂后,应将工具洗净(药勺要擦干)后,才可取用另一种试剂。
(3)试剂取用后一定要将瓶塞盖紧,不可放错瓶盖和滴管,绝不允许张冠李戴,用完后请及时将瓶放回原处,以免遗忘,带来不便。
(4)已取出的试剂不能再放回原试剂瓶内(怕产生原试剂的再次污染)。

 

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