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上海远慕生物科技有限公司

全血细胞培养染色体技术常用试剂配制
点击次数:28 发布时间:2020-07-07

一、国内实验室应用试剂配制
(一)培养液
(1)RPMI1640培养液:称取RPMI培养基9.8g,碳酸氢钠1.9g、青霉素100u/ml,加双蒸水至1000ml,调节 pH7.2~7.4无菌过滤冻存备用。
(2)小牛血清商品:成都生物制品厂。
(3)植物凝集素(PHA):自制或成品(重庆药检所)。
(4)pH调整液:5% NaHCO3溶液高压灭菌(8磅15min),0.1N稀盐酸液100ml。
(5)秋水仙素:10mg/ml无菌过滤高压灭菌(8磅10min)。
(6)磷酸缓冲液:pH7.4。
大神棋牌磷酸氢二钠28.8g(H2O)、磷酸-二氢钾2.67g(无水),溶于1000ml双蒸水中,加肝素,终浓度为100u/ml。

(7)Giemsa染色液:
Giemsa粉剂 1g
甘油 66ml
在研钵中,加入少量甘油油仔细研磨然后放甘油全部加磨,60℃温箱中保温2h,冷却后加入甲醇66ml。装入有色瓶中混合待用。染色时用pH7.4磷酸缓冲液稀释10倍,随配随用。

 

(二)固定液
(1)甲酸:冰乙酸3:1混合即用。
(2)PBS缓冲液配制:
NaCl 16g Na2HPO4(12H2O) 5.65g
KCl 0.4g KH2PO4 0.4g
加双蒸水至1000ml pH7.0。
取5%胰酶(生理盐水配制)1ml加入50ml PBS液中(最终浓度为0.025%),4℃冰箱待用。

二、细胞培养(Bhatl B和McGee JOD,1990)
1.完全培养基
RPMI 76.0ml
胎牛血清 20.0ml
植物凝集素 2.0ml
抗生素/抗菌素溶液(100)

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