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菌落PCR(Colony PCR)方法
点击次数:13 发布时间:2020-07-28

JUNLUOPCR(Colony PCR)KEBUBITIQUJIYINZUDNA,BUBIMEIQIEJIANDING,ERSHIZHIJIEYIJUNTIREJIEHOUBAOLUDEDNAWEIMOBANJINXINGPCRKUOZENG,SHENGSHISHAOLI。JIANYISHIYONGZAITISHANGDETONGYONGYINWU。TONGCHANGLIYONGCIFANGFAJINXINGZHONGZUTIDESHAIXUANHUOZHEDNACEXUFENXI。ZUIHOUDEPCRCHANWUDAXIAOSHIZAITITONGYONGYINWUZHIJIANDECHARUPIANDUANDAXIAO。

JUTIFANGFA:

1、PCR混合物的制备
Taq buffer(10×) 20 ul
dNTP(2.5 mM) 5 ul
Primer Forward(50 mM) 10 ul
Primer Reverse(50 mM) 10 ul
ddH 2O 147 ul
Taq(2U/ul) 8 ul
total 200 ul
大神棋牌将上述溶液混匀,10 ul每管分装于200 ul PCR管中。

大神棋牌2、CHANGWENXIASUIJITIAOXUANZHUANHUABANSHANGDEZHUANHUAZI,YONGMIEJUNDEYAQIANHUOQIANGTOUTIAOQUSHAOLIANGJUNTI,ZAILBQIONGZHITANGPINGBANSHANGQINGDIAN,ZUOYIKAOBEI;RANHOUJIANGZHANYOUJUNTIDEYAQIANHUOQIANGTOUZHIYUXIANGYINGDEZHUANGYOUPCRHUNHEWUDEPCRGUANZHONGXIDISHUXIA(GUANZIZUOHAOJIHAO,RUPINGBANSHANGDIANDESHI1#,ZEGUANZISHANGYEBIAO1#,YIBIANSHAIXUANDAOKELONGHOUDEKUODAOPEIYANG),GAIJINGUANZI。

大神棋牌3、JIANGHUNYOUJUNTIDEPCRHUNHEWUZHIYU PCRYI ZHONG,ANCHANGGUITIAOJIANKUOZENG。DIANYONGJIANCESHIFOUDEDAOMUDEPIANDUAN。RUYOUZEWEIYANGXINGKELONG。

4、JIANGYIJINGJIEZHONGYOUJUNLUODEPINGBANZHI37℃PEIYANGXIANGPEIYANGGUOYE,SHIJUNLUOKUOZENG;CIRITIAOXUANYANGXINGKELONGZUOJINYIBUSHAIXUANHUOPEIYANG。BUZHOU2YEKEYIBUDIANBAN,ZHIJIEJIEZHONGYAOJUN,RUGUOZAOSHANGZUOPCRDEHUA,XIAWUJIUKEYITIZHILI,DEDAOZHONGZUZAITI。

注意事项:设计引物很关键。一般如果是定向克隆,用载体上的通用引物即可;如pET系列可用T7通用引物。如果是非定向克隆(如单酶切或平末端连接),一条引物用载体,一条引物用目的基因上的,这样就可以比较方便的鉴定了,而且错误概率很低。PCR条件的选择接近最-佳大神棋牌,同时挑取的菌体不宜太多,否则会有非特异性扩增。

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