JUNLUOPCR（Colony PCR）KEBUBITIQUJIYINZUDNA，BUBIMEIQIEJIANDING，ERSHIZHIJIEYIJUNTIREJIEHOUBAOLUDEDNAWEIMOBANJINXINGPCRKUOZENG，SHENGSHISHAOLI。JIANYISHIYONGZAITISHANGDETONGYONGYINWU。TONGCHANGLIYONGCIFANGFAJINXINGZHONGZUTIDESHAIXUANHUOZHEDNACEXUFENXI。ZUIHOUDEPCRCHANWUDAXIAOSHIZAITITONGYONGYINWUZHIJIANDECHARUPIANDUANDAXIAO。

JUTIFANGFA：

1、PCR混合物的制备
Taq buffer（10×） 20 ul
dNTP（2.5 mM） 5 ul
Primer Forward（50 mM） 10 ul
Primer Reverse（50 mM） 10 ul
ddH 2O 147 ul
Taq（2U/ul） 8 ul
total 200 ul
大神棋牌将上述溶液混匀，10 ul每管分装于200 ul PCR管中。

大神棋牌2、CHANGWENXIASUIJITIAOXUANZHUANHUABANSHANGDEZHUANHUAZI，YONGMIEJUNDEYAQIANHUOQIANGTOUTIAOQUSHAOLIANGJUNTI，ZAILBQIONGZHITANGPINGBANSHANGQINGDIAN，ZUOYIKAOBEI；RANHOUJIANGZHANYOUJUNTIDEYAQIANHUOQIANGTOUZHIYUXIANGYINGDEZHUANGYOUPCRHUNHEWUDEPCRGUANZHONGXIDISHUXIA（GUANZIZUOHAOJIHAO，RUPINGBANSHANGDIANDESHI1＃，ZEGUANZISHANGYEBIAO1＃，YIBIANSHAIXUANDAOKELONGHOUDEKUODAOPEIYANG），GAIJINGUANZI。

大神棋牌3、JIANGHUNYOUJUNTIDEPCRHUNHEWUZHIYU PCRYI ZHONG，ANCHANGGUITIAOJIANKUOZENG。DIANYONGJIANCESHIFOUDEDAOMUDEPIANDUAN。RUYOUZEWEIYANGXINGKELONG。

4、JIANGYIJINGJIEZHONGYOUJUNLUODEPINGBANZHI37℃PEIYANGXIANGPEIYANGGUOYE，SHIJUNLUOKUOZENG；CIRITIAOXUANYANGXINGKELONGZUOJINYIBUSHAIXUANHUOPEIYANG。BUZHOU2YEKEYIBUDIANBAN，ZHIJIEJIEZHONGYAOJUN，RUGUOZAOSHANGZUOPCRDEHUA，XIAWUJIUKEYITIZHILI，DEDAOZHONGZUZAITI。

注意事项：设计引物很关键。一般如果是定向克隆，用载体上的通用引物即可；如pET系列可用T7通用引物。如果是非定向克隆（如单酶切或平末端连接），一条引物用载体，一条引物用目的基因上的，这样就可以比较方便的鉴定了，而且错误概率很低。PCR条件的选择接近最-佳大神棋牌，同时挑取的菌体不宜太多，否则会有非特异性扩增。