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远慕分析:血红蛋白测定哪些方法?
点击次数:57 发布时间:2020-07-10

1.氰化高铁血红蛋白HiCN测定法:除SHb外
推荐参考方法,具有操作简单、显色快、结果稳定可靠、读取吸光度后可直接定值等优点。致命的弱点是氰-化钾(KCN)试剂有剧-毒,使用管理不当可造成公害。
氰化高铁血红蛋白测定法操作

(1)直接测定法
①加转化液:试管内加5ml HiCN转化液
②采血与转化:取全血20μl,加到盛有转化液的试管底部,用上清液反复冲洗吸管3次,充分混合,静置5min。
③测定:以符合WH0标准的分光光度计,波长540nm处,光径(比色杯内径)1.000cm,HiCN转化液或蒸馏水调零,测定吸光度(A)。
④计算:根据样本的吸光度(A)直接计算出血红蛋白浓度(g/L)
(A为测定管吸光度,44为毫摩尔消光系数,64458/1000为1mol/L Hb溶液中所含Hb克数,251为稀释倍数。)


(2)HiCN标准液比色法测定
HiCN参考液(50g/L、100g/L、150g/L、200g/L),分别测得540nm处的吸光度,以参考液血红蛋白含量为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线或求出K值。
①标准曲线绘制和K值计算
②样本吸光度
③通过标准曲线查出样本血红蛋白浓度,或用K值计算,血红蛋白浓度Hb(g/L)=K×A。
 



注意事项
(1)HiCN贮存:转化液贮存在棕色有塞玻璃瓶中,不能贮存在塑料瓶中,否则会使CN-丢失,测定结果偏低。HiCN转化液在4℃保存一般可数月,不能在0℃以下保存,因为结冰可使高铁氰-化钾还原,试剂失效。
(2)标本:异常血浆蛋白质、高脂血症、白细胞数超过30×109/L、脂滴等可产生浊度,干扰Hb测定。
(3)HiCN转化液是一种低离子强度、pH近中性的溶液(7.2±0.2)。样本中白细胞过高或球蛋白异常增高时,HiCN比色液会出现浑浊。
(4)氰-化钾试剂是剧,测定后的废液应收集于广口容器中,首先以水稀释废液(1:1),再按每升上述稀释液加次氯酸钠35ml,充分混匀,敞开容器,放置15h以上,使CN-氧化成C02和N2挥发,或水解成C032-和NH4+,再排入下水道。废液不能直接与酸性溶液混合,因为氰化-钾遇酸可产生剧毒的氰氢酸气体。


2.十二烷基-硫酸钠血红蛋白SDS测定法:
具有操作简单、呈色稳定、准确性和精确性符合要求、无公害等优点。但由于摩尔消光系数尚未最后确认,不能直接用吸光度计算Hb浓度,而且SDS试剂本身质量差异较大,会影响检测结果。


3.HiN3最大吸收峰542nm,显色快,结果稳定。

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