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细胞传代是否一定要等24小时吗?
点击次数:58 发布时间:2020-07-08

问:我养的是RAW264.7细胞,不知道为什么长得这么快?而且消化也很容易,好像和园子里其他养RAW细胞的很不一样。一般传代(1传2)后大概16-20个小时左右就能够长到90%,请问是应该一定等到24小时再传代,还是可以等长到90%(<24小时)如果没到24小时就传代的话,会对细胞状态有影响么?

答:很多试验中要求分盘后24h时再开始实验(如转染),除了让细胞充分贴壁,还有一个重要原因就是使细胞达到正常代谢水平。从你的描述来看,如果细胞贴壁还比较快的话,个人认为可以进行传代,若细胞密度过高达接触抑制,细胞比较容易老化。

还有建议最-好传代时采用更低一些的稀释度(1:3或者更低)。 感觉1:2太高了,建议到ATCC上查找一下,会找到最-佳的subcultivation ratio。以便保证细胞的最-佳状态,不要舍不得扔细胞,subculture的时候把细胞全用上,你的细胞长得快,频繁的subculture,细胞不但不能优化还可能会发生变异。

 


问:请问1:2太高了是什么意思啊?是不是要1:3以上传代呢?因为如果传得太稀了,细胞长起来比较慢,可能有群集效应。所以一般每天传代,到底传代频繁是能够改善细胞状态还是像你所说得会造成变异呢?

答:刚帮你查下:RAW 264.7,Subcultivation ratio: A subcultivation ratio of 1:3 to 1:6 is recommended。Medium renewal: Replace or add medium every 2 to 3 days。所以说你1:2传太高了,是这个意思。建议加大传代比率,1:3或1:4传。反复传代劳命伤财,对细胞也有害,特别是细胞未到24h。细胞传代的比率要适当。细胞太少,生长慢,因细胞生长需相互间有信号传导。

细胞太多,也不好,因细胞太多会有“接触抑制”。我也从ATCC上看过这个,不过由于我们养的细胞不可能和他们的条件完全一样,所以对于传代就不可能完全按照它们说的。不过看来还是有一定的道理哦。现在觉得,其实1:3传代可能更适合现在的细胞生长速度,长得太快太慢了,细胞都挤的变圆了。细胞太少的时候会抑制它们的生长速度。

问:请教一下,为什么细胞太少的时候会抑制它们的生长速度呢?

答:细胞生长需要一定的辅因子,而这些不仅要求血清供给,还有细胞在培养过程中生成的,若细胞太少,会导致这类因子不足。有时候会在培养细胞时候,放一些伴生长细胞是这个原因,好像叫保姆细胞。我养的是骨肉瘤细胞,生长速度也很快。

我一般等长满了就传代,不是特别关注时间。你在传代分瓶的时候多分几瓶。但也不能太多,因为细胞太少的时候会抑制它们的生长速度。看是什么细胞了,如是生长比较旺盛的细胞,只要贴壁情况良好就可以传。我培养的是hela细胞。复苏后不到24小时的换液以后,过了-6小时就可以传代了。但是好像对其他多数细胞建议还是24小时后传。

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